豬藍(lán)耳病毒PCR檢測(cè)的前處理步驟有哪些

【實(shí)驗(yàn)原理】

應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中指標(biāo)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中指標(biāo)相結(jié)合，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）與待測(cè)樣品中豬藍(lán)耳病毒(PRRS)濃度呈正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中豬藍(lán)耳病毒(PRRS)的濃度。

豬藍(lán)耳病毒（PRRSV）PCR檢測(cè)的前處理步驟主要包括樣本采集、保存及核酸提取：

樣本采集‌：

‌組織樣本‌：優(yōu)先采集肺臟、扁桃體、淋巴結(jié)等含毒量高的組織，活體剖檢時(shí)需無菌操作，每份組織單獨(dú)封裝‌。

‌血液/血清‌：前腔靜脈采血3-5ml，凝固后2-8℃冷藏（≤3天）或-20℃冷凍（≤30天），避免溶血‌。

‌其他樣本‌：如口腔液、閹割睪丸液、死胎舌頭等，需注意避免環(huán)境污染。

樣本保存與運(yùn)輸‌：

‌短期保存‌：2-8℃冷藏（≤72小時(shí)），長(zhǎng)期需-70℃冷凍，避免反復(fù)凍融（≤3次）‌。

‌運(yùn)輸條件‌：加冰密封，維持低溫狀態(tài)。

核酸提取‌：

‌組織處理‌：稱取2g組織加入PBS研磨，反復(fù)凍融3次裂解細(xì)胞。

‌裂解與純化‌：使用TRIzol法提取RNA，加入氯仿-異戊醇抽提，異丙醇沉淀后75%乙醇洗滌，DEPC水溶解‌。